产品货号:
BM0301
中文名称:
M-MLV反转录酶(RNase H-)
英文名称:
M-MLV RNase H- Reverse Transcriptase
产品规格:
10kU
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是通过基因修饰和重组技术克隆表达的RNase H活性缺失型莫洛尼氏鼠白血病毒(M-MLV)逆转录酶。经过基因工程改造,本酶的最适反应温度提升至42℃,延伸能力更强,可用于较长的cDNA合成。
37℃条件下,以Poly(A)-Oligo(dT)为模板/引物,在10min内,掺入1nmol的[3H] dTTP所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
组分 | 规格 |
M-MLV反转录酶(RNase H-,200U/μL) | 50μL |
5×M-MLV First Strand Buffer | 500μL |
100mM DTT | 100μL |
保存:-20℃
- 宿主原性DNA检测:无宿主DNA污染。
- 核酸内切酶残留检测:将酶液与超螺旋质粒DNA在37℃温育4h,通过DNA电泳检测质粒无变化。
- 核酸外切酶残留检测:将酶液与双链DNA底物在37℃温育16h,通过DNA电泳检测双链DNA底物无变化。
一、第一链cDNA合成
- 于冰上配制如下反应体系:
成分 用量 引物 Oligo(dT)20
或随机引物
或基因特异性引物终浓度2.5μM
终浓度2.5ng/μL
终浓度0.25μM模板RNA 50ng~1μg/20μL dNTP Mix (10mM Each) 1μL Nuclease-Free Water 至13μL - 推荐使用试剂盒提取的已去除基因组DNA污染的高质量RNA作为模板。
- 将以上混合液在65℃温育5min,迅速取出置于冰上冷却1min;
- 向反应混合液中继续加入:
成分 用量 5×M-MLV First Strand Buffer 4μL 0.1M DTT 1μL M-MLV反转录酶(RNase H-,200U/μL) 1μL 可选:RNase Inhibitor(40U/μL) 1μL - 轻柔吸打混匀后,瞬离;
- 若使用Oligo(dT)20或基因特异性引物,42℃温育30min;若使用随机引物,先25℃温育5min,之后42℃温育30min;
- 反应结束后,85℃温育5min以终止反应;
- 将获得的cDNA溶液置于冰上,用于后续实验。
- cDNA溶液置于-20℃可保存半年;置于-80℃可长期储存。
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